defgf67ay
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 Wysłany: Pon 13:11, 28 Lut 2011 Temat postu: ugg stiefel 两种PCR法Ç |
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两种PCR法与培养法检测肺炎支原体效果研究
中产物蒸发．每次实验均设阴性、阳性和空白对照，两次反应条件一致，均为95℃预变性5rain后，再行30个循环．每个循环为95℃15s，65oClmin，72℃1．5min，后延伸阶段为72℃10rain,[link widoczny dla zalogowanych]。取每次扩增产物10txL在2％琼脂糖凝胶(含0．5lxg／mL溴化乙锭)上电泳，紫外投射仪上观察记录结果，与阳性对照有相同条带的判为阳性。2结果3种方法中，以培养法的阳性率最低，仅4例，与其它方法比较P<O．01，而以培养一增强套式PCR的阳性率最高,[link widoczny dla zalogowanych]，达23例，3组比较，xL16．469，P<0．01。与传统PCR法比较，本组采用的培养一增强套式PCR灵敏度为100％．特异度为88％，准确率为91％。3讨论实验室检查是临床确诊肺炎支原体感染的客观指标之一,[link widoczny dla zalogowanych]。以往的支原体肺炎诊断有从标本中分离病原体、冷凝集试验、代谢抑制试验、补体结合试验、间接血凝试验等几种方法，但这些方法由于时间长、难度大、试剂不能保存一2O一等因素，不能广泛地作为常规检查『2_。另外，免疫功能低下的患者容易感染MP，感染后由于抗体产生不足，血清抗体不升高等原因，会造成免疫学检测无效。PCR技术是新近建立起来的高效的DNA分子生物学分析技术。佘翠萍等E3]认为支原体检测以PCR法最为敏感．明显优于分离培养、免疫荧光检测和ELISA法。因此，国内外已有很多学者将PCR应用于多种病原体的检测。目前，已有许多实验证明套式PCR比传统PCR更进一步提高了检测的敏感性和特异性。其方法是设计两套引物，先用第一套引物进行PCR，然后取少量PCR产物作模板，用第二套引物再进行PCR。套式引物的退火互补位置位于第一套引物之内，因此称为套式引物，它们只能扩增靶序列，不能扩增无关序列，从而获得理想的结果。我们采用培养一增强套式PCR优于传统的套式PCR方法．其扩增过程不是直接在样品上进行而是在支原体培养基上进行．采取的咽拭子标本被立刻接种，且在一夜间培养，通过该步骤,[link widoczny dla zalogowanych]，抑制了其它菌的生长，污染率与传统套式PCR相比大大降低。另外,[link widoczny dla zalogowanych]，本组采用的提取DNA的方法亦优于传统方法：一方面较以往方法节省了时间，另一方面亦防止了操作过程中DNA的丢失。1998年，Mari—anneAbele—Hom等采用培养～增强PCR与培养一增强套式PCR法检测MP，证明了该方法优于传统的PCR方法。本组用两种PCR法与培养法同时检测67份呼吸道感染患儿的咽拭标本，结果分离培养出4株MP，传统PCR检测出17例阳性标本，而培养～增强套式PCR检测出23例阳性标本。培养一增强套式PCR检测为阳性结果而传统PCR为阴性的6例标本，经双份血清学检测证明亦为阳性。结果表明培养一增强套式PCR法结果比较准确，而且检测快速．可以在感染早期就检测到MPDNA．有助于临床诊断和及时治疗。
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